GB 4789.3 大腸菌群的檢測適用方法解讀及注意事項匯總
GB/T 4789.3-2003 大腸菌群測定
03版只有一個方法:MPN法,也有人叫九管法。
陽性的方法步驟:
制樣→接種到乳糖膽鹽發(fā)酵管→伊紅美藍培養(yǎng)基→乳糖發(fā)酵管(同時做革蘭氏染色)→看表計算。
其實這個方法比較簡單的一個方法,也是常說的半定量的方法。
我們下面說一下這個方法的注意事項。
第一,這個方法是一個半定量的方法,最不好要用于測量審核上。
第二,做實驗前要注意導(dǎo)管里是否有空氣(最好使用大直徑的小導(dǎo)管),以免影響結(jié)果的判斷,增加工作量。
第三,經(jīng)常有人會無視標(biāo)準(zhǔn)有一個糞大腸的檢測步驟。這個很少人會去做。
第四,對伊紅美藍的陽性現(xiàn)象不了解(其實實驗室可以在做出陽性結(jié)果之后,將菌接出來,以后用來做人員培訓(xùn))。
第五,對標(biāo)準(zhǔn)是否還在實行不清楚,很多人在16版出來的時候,都在問03版是不是也作廢了,其實并沒有。03版目前還在執(zhí)行著(畢竟還有些標(biāo)準(zhǔn)還在用著它的單位)。
GB 4789.3-2016 大腸菌群計數(shù)
這個標(biāo)準(zhǔn)里有兩個方法:MPN法和平板計算。
首先說MPN法,它相對于03版的MPN有一定的區(qū)別。第一這兩個方法用的培養(yǎng)基完全不一樣。第二16版的方法沒有伊紅美藍畫線,這樣的過程減少了一步相對簡單一點。第三單位變了。
平板法:其實平板是我們目前用得最多的一個方法,步驟看標(biāo)準(zhǔn)的實驗流程圖。
那么平板法有什么注意的呢?
第一,做平板法的時候需要覆蓋第二層培養(yǎng)基,它的作用是:有助于典型菌落形成也為了防止蔓延性細(xì)菌生長。
第二,挑菌,其實這一步主要怕挑菌的時候挑不到菌,其實你可以把帶菌的部分培養(yǎng)基完全挑起來(不要怕培養(yǎng)基包含著它出不來)放到BGLB內(nèi),然后用手腕力搖一下試管就可以把培養(yǎng)基打碎。
第三,計算問題,標(biāo)準(zhǔn)挑取10個典型菌落。然后計算比例再乘以所有典型菌落的數(shù)(有人會在這里糾結(jié),覺得不太準(zhǔn)確,應(yīng)該所有菌落都挑?。┢鋵嵾@個一個想法很好,但是這樣之后增加工作量的同時影響效率。其實在平板上你應(yīng)該區(qū)分典型菌落出來去做就可以(當(dāng)然這步要考驗一個人的眼力和經(jīng)驗)初學(xué)者可以根據(jù)形態(tài)進行分類,然后以形態(tài)特征進行驗證。
兩個版本的一些檢測方法和注意事項都說了,那么我們說一下一些朋友常問的一些問題。
1. 03版的結(jié)果能不能和10版的結(jié)果進行換算和比較。
答:其實換算是不行的,這個兩個不同的標(biāo)準(zhǔn)。如果只是進行比較兩個結(jié)果是可以的,但是不建議。
2.如何選擇檢測方法?
答:你要根據(jù)產(chǎn)品的執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)去選擇檢測方法,不是說你喜歡那種就可以用那種。
3、同一批產(chǎn)品,檢測的兩份結(jié)果不一樣,是不是那里出問題?
答:其實不是出問題,這個是正常的,同一批產(chǎn)品不代表他們的微生物檢測結(jié)果是一模一樣的,如果是這樣也沒必要做五份去驗證產(chǎn)品合格了吧?如果說同一份樣品(制成一份樣)出現(xiàn)結(jié)果差好遠(yuǎn)的話,這里就要去分析那里出問題。
好像就這些問題比較常見。